摘要：目的 就納米銀對(duì)牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜的殺菌作用進(jìn)行探討。方法 收集80顆無(wú)齲壞、完整無(wú)缺的前磨牙，將其制成309個(gè)牙本質(zhì)片，隨機(jī)分為A組（納米銀組）、B組（次氯酸鈉組）、C組（氯化鈉組），每組有103個(gè)樣本。活菌菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)糞腸球菌生物膜活菌數(shù)，糞腸球菌生物膜的內(nèi)層活菌、中間層活菌、外層活菌百分比用激光共聚焦顯微鏡來(lái)進(jìn)行觀察。結(jié)果隨著0.1%納米銀溶液的處理時(shí)間的延長(zhǎng)，糞場(chǎng)球菌生物膜活菌的數(shù)量呈現(xiàn)出較為明顯的降低趨勢(shì)，到24h之后就沒(méi)有活菌出現(xiàn)在生物膜內(nèi)。與此同時(shí)，生物膜內(nèi)層、中間層、外層活菌的平均厚度、百分比逐漸減少。結(jié)論 對(duì)于糞腸球菌生物膜而言，含量為0.1%的納米銀溶液有著較強(qiáng)的殺菌作用和滲透能力，能夠隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而讓殺菌作用增強(qiáng)，最佳的作用時(shí)間為處理24h以上。 
　　關(guān)鍵詞：納米銀；牙本質(zhì)表面；糞腸球菌生物膜；殺菌作用 
　　從目前來(lái)看，再感染根管中最常檢測(cè)到的細(xì)菌為糞腸球菌，它也是主要的致病菌。在這種情況下，尋找出一種有效、安全的抗菌劑，是提高根管治療成功率的重要途徑之一。而納米銀的生物安全性良好、抗菌性能較強(qiáng)，特別適用于作為新型抗菌劑[1]。本文就納米銀對(duì)牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜的殺菌作用進(jìn)行探討。 
　　1 資料與方法 
　　1.1一般資料 
　　1.1.1實(shí)驗(yàn)菌株 選擇由廣東省微生物研究所提供的糞腸球菌。 
　　1.1.2主要實(shí)驗(yàn)試劑 心腦浸出液培養(yǎng)基、含量為5.25%次氯酸鈉溶液、含量為0.1%納米銀溶液、含量為0.9%氯化鈉溶液。 
　　1.1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器：FV500-IX81激光共聚焦顯微鏡、B3510E-DTH超聲清洗器、11-1280-250型切片機(jī)、JSM-6330E場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡、LI20-2恒溫培養(yǎng)箱、厭氧罐。 
　　1.2方法 
　　1.2.1牙本質(zhì)片的制備及分組 收集80顆無(wú)齲壞、完整無(wú)缺的前磨牙，將其制成309個(gè)牙本質(zhì)片，隨機(jī)分為A組（納米銀組）、B組（次氯酸鈉組）、C組（氯化鈉組），每組有103個(gè)樣本。樣本經(jīng)超聲清洗、滅菌之后保存在無(wú)菌PBS緩沖液內(nèi)，保存溫度控制在4℃。 
　　1.2.2構(gòu)建牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜：復(fù)蘇糞腸球菌后，將其放置在BHI液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在37℃，培養(yǎng)時(shí)間控制在16h。菌懸液用BHI液體培養(yǎng)基來(lái)調(diào)整到1×107CFU/ml，按每孔2ml加到24孔板內(nèi)，每孔1個(gè)樣本。 
　　1.2.3糞腸球菌生物膜的表面形態(tài)進(jìn)行掃描電鏡觀察：將A、B、C組樣本都進(jìn)行24h培養(yǎng)，然后從其0h小組中隨機(jī)取3個(gè)樣本，將這些樣板上沒(méi)有黏附的細(xì)菌用雙蒸水清洗2次以上，再進(jìn)行固定制樣，以此觀察糞腸球菌生物膜的表面形態(tài)。 
　　1.2.4活菌菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)糞腸球菌生物膜活菌數(shù) 分別采用含量為5.25%次氯酸鈉溶液、含量為0.1%納米銀溶液、含量為0.9%氯化鈉溶液對(duì)樣本進(jìn)行處理，在處理之前的1、6、12、24h時(shí)分別從三組中各取10個(gè)樣本，雙蒸水清洗2次，然后再將其放入無(wú)菌PBS的試管中，培養(yǎng)48h后菌落計(jì)數(shù)。 
　　1.2.5糞腸球菌生物膜的內(nèi)層活菌、中間層活菌、外層活菌百分比用激光共聚焦顯微鏡來(lái)進(jìn)行觀察。 
　　2 結(jié)果 
　　隨著0.1%納米銀溶液的處理時(shí)間的延長(zhǎng)，糞場(chǎng)球菌生物膜活菌的數(shù)量呈現(xiàn)出較為明顯的降低趨勢(shì)，到24h之后就沒(méi)有活菌出現(xiàn)在生物膜內(nèi)。與此同時(shí)，生物膜內(nèi)層、中間層、外層活菌的平均厚度、百分比逐漸減少。生物膜結(jié)構(gòu)被含量為0.1%納米銀溶液處理1h之后，并沒(méi)有完全解體，但生物膜內(nèi)層活菌百分比降至（20.8%±4.5%），中間層活菌百分比降至（27.4%±5.6%）；在處理6h之后，生物膜內(nèi)層活菌百分比降至（1.8%±0.9%），中間層活菌百分比降至（2.0%±0.9%）。0.1%納米銀溶液處理12h、24h，生物膜各層活菌百分比與1.313%次氯酸鈉溶液組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但是都要明顯低于0.9%氯化鈉溶液組，存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。作者： 趙亮 閆磊 陰平 付爽 袁雪明 周立波

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